Steigerung der Produktivität der IVT-Reaktion durch HPLC-Chromatographie

Jun 15, 2023

Diese von uns ausgestrahlten Features:Rok Sekirnik, PhD, Leiter Prozessentwicklung mRNA/pDNA, BIA Separations, jetzt ein Sartorius-Unternehmen.

In-vitro-Transkriptionsreaktionen (IVT) werden normalerweise als Batch-Prozesse durchgeführt. Aufgrund ihrer katalytischen Basis ist es möglich, Reaktionszeiten und Ausbeuten durch kontinuierliche Zugabe verbrauchter Reagenzien zum Reaktionsgemisch zu verlängern. Mit Fed-Batch-Strategien konnte bisher jedoch nur eine Steigerung der mRNA-Produktion um 40 bis 100 % erreicht werden. Eine der Haupteinschränkungen der Entwicklung war der geringe analytische Durchsatz zur Quantifizierung von mRNA- und NTP-Vorläufern; Die Produktivität wird typischerweise als Endpunktmessung der mRNA-Konzentration bestimmt.

In diesem Webinar diskutieren wir eine HPLC-basierte Analysemethode unter Verwendung eines multimodalen Liganden auf Basis eines Anionenaustausch-/Wasserstoffbrückenliganden (PrimaS) zur Überwachung der IVT-Reaktion, die eine gleichzeitige Quantifizierung von NTPs, Capping-Reagenz, Plasmid und mRNA ermöglicht innerhalb von 3,5 Min.

Bei der Überwachung der IVT-Reaktion kann ein Batch-Ansatz mit einer durchschnittlichen Produktivität von 3–5 mg/ml in einen Fed-Batch-Ansatz mit einer Ausbeute von 10–12 mg/ml umgewandelt werden. Es werden zwei Ansätze zur Steuerung der IVT-Reaktion demonstriert, einer konzentriert sich auf die Produktivität von ungekappter mRNA, ein anderer auf die Produktivität von gekappter mRNA und erfordert daher eine präzise Kontrolle des NPT:Capping-Reagenz-Verhältnisses.

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